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              多肽合成生產方法

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              多肽合成生產方法

              發布日期:2020-12-28 作者: 點擊:

              多肽合成生產方法

              除去保護

              Fmoc保護的柱子和單體須用一種堿性溶劑(piperidine)去除氨基的保護基團。

              激活和交聯

              下一個氨基酸的羧基被一種激活劑所激活?;瘜W工藝常用HBTU/HCTU/HITU/HATU+NMM/DIPEA或HOBT+DIC作激活劑,激活的單體 與游離的氨基反應交聯,形成肽鍵。在此步驟使用大量的超濃度試劑驅使反 應完成。循環:這兩步反應反復循環直到合成完成。 氨基酸縮合結束后,可用適量TFA進行洗脫,根據起酸堿性,可選擇10%TFA/DCM溶液,至100%TFA,以此類推。(注:此種方法為個人合成經驗,并無文獻資料可查;可根據需要進行參考。知識有限,望謹慎參考)

              HPLC分析純化

              分析HPLC使用柱子和泵系統,可以經受傳遞高壓,這樣可以用極細的微粒(3-10μ m)做填料。由此多肽要在幾分鐘內高度被分析。HPLC分兩類:離子交換和反相。 離子交換HPLC依靠多肽和固相間的直接電荷相互作用。柱子在一定PH范圍帶有特定電荷衍變成一種離子體,而多肽或多肽混合物,由其氨基酸組成表現出相反電荷。 分離是一種電荷相互作用,通過可變PH, 離子強度, 或兩者洗脫出多肽,通常, 先用低離子強度的溶液,以后逐漸加強或一步一步加強,直到多肽火柱中洗脫出。離子交換分離的一個例子使用強陽離子交換柱。如sulfoethylaspartimide通過酸性PH中帶正電來分離。

              反相HPLC條件與正常層析正相反,多肽通過疏水作用連到柱上,用降低離子強度洗脫, 如增加洗脫劑的疏水性。通常柱子由共價吸附到硅上的碳氫烷鏈構成,這種鏈長度為G4-G8碳原子。 由于洗脫是一種疏水作用。長鏈柱比短鏈對小的, 高帶電肽好。另一方面大的疏水肽用短鏈柱洗脫好。 然而,總體實踐中, 這兩類柱互變無多少顯著差別,別類載體由碳水化合物構成, 比如苯基。

              典型的操作常由兩綬沖劑組成,0.1%TFA-H2o和80% acetonitrile 0.1%TFA--H2o稀acetonitrile。用線型梯變以每分鐘0.5%到1.0%改變的速度混合。常見分析和純化用柱為4.6×250mm(3-10μ m)和22×250mm(10μ m). 如果用徑向填柱,那么大小是8×100(3-10μ m)和25×250mm(10μ m)

              大量各種緩沖劑含許多不同試劑,比如heptafluorobutyric酸,0.1%磷酸, 稀He formic酸(5-6%, pH2-4), 10-100mM NH4HCO3, 醋酸鈉/氨,TFA/TEA,磷酸鈉或鉀,異戊酚。這樣許多不同組合可形成緩沖劑,但要注意一點:硅反相柱料不能長時間暴露于高pH,甚至微堿pH, 因為這樣會破壞柱子。

              不要把肽含量和純度搞混了,肽的純度可能是100%, 而肽含量相關帶電基團(如Arg, Lys )的抗離子量和肽親水性決定,這是合成肽的本身特性。

              本文網址:http://www.altofcenter.com/news/448.html

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