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              凍干多肽的溶解

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              凍干多肽的溶解

              發布日期:2021-02-26 作者: 點擊:

              1.多肽溶解的主要問題是二級結構的形成。
              雖然疏水肽鏈二級結構的形成更明顯,但除最短的肽鏈外,此現象產生在幾乎所有肽鏈,與極性無關。所以,溶解多肽的第一個原則是使用無菌蒸餾水或去離子水,當然無氧水最好。
              多肽溶液可能遇到細菌降解。為防止此情況的發生,應溶解在無菌的蒸餾水中或用0.45或0.2孔徑的濾膜過濾除菌。
              含有 Cys、Met、Trp的多肽很容易氧化,應溶于無氧的水中。無氧水可通過注入惰性氣體(氮、氦、氬)減壓除氣得到。
              2.若多肽不溶于純水,超聲處理有助于打碎顆粒并增加溶解度。注意:超聲處理會引起溶液發熱或多肽降解。
              3.若多肽含有多個堿性氨基酸,使用(1-10%)的乙酸水溶液:對于疏水性強的多肽,應使用50%的乙酸。
              4.若多肽中含有大量酸性氨基酸,可用氨溶液(1-10%)或乙酸乙基嗎啡或重碳酸鹽等揮發性的堿性緩沖液溶解。PH值在層析前必須調整。
              5.異丙醇和乙腈能溶解中等大小的多肽。若肽要上柱,有機溶劑的量必須很少否則將嚴重影響停留時間。
              6. 若多肽因含有Val、Leu、Met、Phe、Tyr、Ala等芳熗鏈而高度疏水、或為中性肽時,DMF或DMSO等模變性劑的使用,有利于多肽的溶解。
              a.高濃度模變性劑通過破壞多肽的二級結構而助溶。
              b.膜變性劑適于多肽分析液的制備,但可能會對其生物活性的研究工作造成干擾。
              c.DMF是最佳變性劑(最高濃度可達30%),滴加至多肽溶解。
              d.反相層析法時,DMF將與洗脫液前鋒一起流出,根據入量的多少,峰值可能很高。大多數肽能在大量DMF流出后幾分鐘內流出,若肽鏈很小,洗脫太早,多肽的量將很低。

              本文網址:http://www.altofcenter.com/news/431.html

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